4. Выделение ДНК из лейкоцитов.

Лейкоцитарную массу суспендировали в буфере LST. Добавляли

х

равный объем 4 TNLB, осторожно перемешивали и центрифугировали при 5 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок дважды промывали буфером LST -сахароза. Затем к осадку добавляли буфер TNE - 1% SDS и протеиназу К в конечной концентрации 100 мкг/мл. Инкубировали в течение ночи при 50°С. Затем добавляли равный объем смеси хлороформ - изоамиловый спирт (24:1) и экстрагировали ДНК 5 мин. После разделения фаз центрифугированием отбирали верхнюю фазу и процедуру повторяли. Затем ДНК осаждали 3 объемами этанола и центрифугировали при 13 тыс. об/мин при 4°С. Осадок ДНК промывали 75% этанолом на 1 STE, просушивали и растворяли в бидистиллированной воде.